常见的几种禽病毒病采样技术
发布时间：2013-08-01 来源：普莱柯生物
在防治畜禽疾病中，很多畜禽传染病的临床症状不明显，单凭临床经验是难以做到确切诊断、准确用药，往往因此而贻误了病情。为此，需要通过从病畜或尸体采取病料，进一步做微生物学和血清学化验，查清病原，进而有针对性地采取相应的防治措施，以达到预防、控制和扑灭传染病的目的，同时减少临床工作的盲目性，提高兽医人员的技术水平，保护养殖户的利益。而病料采集、保存、送检的方法是否正确，直接影响到检验的结果和防治工作的开展，故采集检测样品是诊断检测工作的重要内容，另外采样的时机是否适宜，样品是否具有代表性，样品处理、保存、运送是否及时等，都会影响到检验结果的准确性和可靠性。
下面就如何正确地采集、保存、送检病料等进行归纳和整理，希望能够对基层兽医和养殖户提供一些借鉴。
一、采集原则
1，新鲜、具代表性，且足量：采集死禽样本，夏天6小时之内完成，冬天在24小时之内完成；采集样品的数量要满足诊断检测的需要，并留有余地，以备必要时复检使用。
2，减少对病料的污染：在做尸体剖检时，应将尸体浸泡在消毒剂溶液中，防止羽毛及皮屑飞扬对病料造成的污染；病料采集时，对采集病料的器械及容器必须提前消毒，减少因器械或盛放病料的容器对病料的污染；尸体剖开腹腔时，第一时间采取病料，减少病料因暴露于空气中而造成的污染。
3，典型采样：选取未经药物治疗、症状最典型或病变最明显的样品，如有并发症，还应兼顾采样。
4，合理采样：根据诊断检测的要求，须严格按照规定采集各种足够数量的样品外，不同疫病的需检样品各异，应按可能的疫病侧重采样。对未能确定为何种疫病的，应全面采样。
5，安全采样：既要保护采样人员，以要防止病原外泄，还要防止样品受到污染。
6，迅速送检：应尽快送实验室进行检测，延误送检时间，会影响到检测质量和结果的可靠性。
二、病料的采集方法
1，组织和实质器官的采集：剖开腹腔后，必须注意肠管的完整。如需进行细菌的分离培养，要以烧红的手术刀片烫烙脏器表面，使用经火焰灭菌的接种针插入烫烙的部位，提取少量的组织或液体，作涂片镜检或接种于培养基上，进行培养。
2，液体病料的采集：采集血液、胆汁、脓肿液、渗出物等液体病料，使用灭菌吸管或注射器，经烫烙部位吸取病变组织的液体，将病料注入灭菌的试管中，塞好棉塞送检。
3，全血的采集方法：用灭菌注射器自鸡的心脏或翅静脉采血2-5毫升，注入灭菌试管中。建议加入少量的抗凝剂（3.8%枸橼酸钠0.1-0.5毫升或柠檬酸钠液，配制方法：葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.42g，加蒸馏水至100ml高压灭菌10磅/10分钟。）
4，血清的采集方法：用灭菌注射器自禽的心脏或翅静脉采血2毫升，注入灭菌的1.5ml离心管中摆成斜面，待血液凝固血清析出后，将血清吸出注入另一个灭菌试管中，备用。
5，肠道及肠内容物的采集方法：选择病变明显部位的肠道，将内容物弃掉，用灭菌生理盐水冲洗干净，然后将病料放入盛有灭菌的30%甘油盐水缓冲液中送检。亦可将肠管切开，用灭菌生理盐水冲洗干净，然后用烧红的手术刀片烫烙粘膜表面，将接种针插入粘膜层，取少量病料接种于培养基上。采集肠内容物则需用烧红的手术刀片烫烙肠道浆膜层，将接种针插入肠道内，吸取少量肠内容，放入试管中或将带有肠内容的肠道两端扎紧，去掉其它部分送检。
6，皮肤及羽毛的采集：皮肤要选病变明显部分的边缘，采取少许放入灭菌的试管中送检；羽毛也要选病变明显部分，用灭菌的刀片刮取羽毛及根部的皮屑少许，放入灭菌的试管中送检；采集孵化室的绒毛需用灭菌镊子采取出雏机出风口的绒毛3-5克，放入灭菌的试管中送检。
三、各种病料的采集部位
表1鸡病毒性疾病主要采集的主要部位
| 疾病名称 | 病原 | 病料采集部位 |
| 鸡新城疫 | 副粘病毒 | 脑组织、喉头、气管、气囊、肝、脾、肺 |
| 禽流感 | A型流感病毒 | 内脏器官、气管粘液、肺、泄殖腔拭子、血液 |
| 传染性法氏囊病 | 双RNA病毒 | 法氏囊、内脏器官、肠道粘液、泄殖腔拭子、血液 |
| 传染性支气管炎病 | 冠状病毒 | 气管栓子、肺组织、肾、肝、脾、淋巴组织、输卵管、气管泄殖腔拭子 |
| 传染性喉气管炎 | A型疱疹病毒 | 气管渗出物、气管、肺 |
| 病毒性关节炎 | 禽呼肠孤病毒 | 关节、腱鞘、脾、泄殖腔、气管 |
| 禽脑脊髓炎 | 禽脑脊髓炎病毒 | 脑、胰 |
| 淋巴白血病 | 禽白血病病毒 | 血液、泄殖腔拭子、肿瘤组织 |
| 马立克氏病 | 疱疹病毒 | 血液、肿瘤组织 |
| 网状内皮组织增殖病 | 网状内皮组织增殖病病毒 | 血液、肿瘤组织、脾 |
| 鸡传染性贫血病 | 鸡传染性贫血病毒 | 肝、皮肤、脾、心脏、胸腺、肺、法氏囊、肾、骨髓、血液 |
| 产蛋下降综合征 | 禽腺病毒 | 肝、胰、气管、肺、空肠、盲肠扁桃体、肠内容、输卵管、畸形蛋、变形卵泡、粪便、血液 |
| 禽痘 | 痘病毒 | 病变组织、口、鼻、咽、喉、食道、气管粘膜的结节 |
| 鸭病毒性肝炎 | 鸭肝炎病毒 | 肝、脾、病变组织、血液 |
| 鸭病毒性肠炎 | 疱疹病毒科鸭瘟病毒 | 肝、脾、脑、肺、肾、口腔分泌物、肠道、粪便、血液 |
| 小鹅瘟 | 鹅细小病毒 | 内脏器官、组织、肠管、粪便、血液 |
1，采集的样品应一种样品一个容器，立即密封，防止样品损坏、污染和外泄等意外发生。也可以根据表1将几种适合检测同种病毒的病料合并于一个容器内。
2，装样品的容器应贴上标签，标签要防止因冻结而脱落，标签标明采集的时间、地点、号码和样品名称，并附上发病、死亡等相关资料，尽快送实验室。
3，根据样品的性状检验要求的不同，作暂时的冷藏、冷冻或其它处理。
4，病料采集后，应先存放于冰箱中1-2小时后，再做微生物检验。
五、病料的送检要点
1，在没有条件的情况下，可以采取运送整鸡、鹅或鸭尸体，运送时用浸透消毒液的布包好，装入塑料袋中运送；如果需要长途运输，整个尸体放入冰箱冰冻过夜。
2，装在容器中的病料应先密封，然后装入冰桶中运送，放入冰袋运送。
3，运送的病料必须标明：送检单位、地址、送检病料的品种、性别、日龄、种类、数量、死亡日期、送检日期、检验目的、送检者姓名，并附临床病例摘要（发病时间、死亡情况、临床症状、产蛋及饮食情况、免疫和用药情况等）。
4，运送病料时一定注意病料要低温保存。供病毒学检验的样品，数小时内要送到实验室，只作冷藏处理，超过数小时的要冷冻处理，可将样品放入-30℃冰箱内冻结后再装入有大小冰块或干冰的冷藏瓶（箱）内运送，亦可将装入样品的容器放入隔热保温瓶内，再放入冰块，然后按100ｇ冰块加入食盐约35克，立即将隔热保温瓶瓶口塞紧，瓶内温度可达-21℃左右。